BL21-CodonPlus (DE3)-RIPL Competent Cell 大腸桿菌化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞

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產(chǎn)品組分：

菌株描述

BL21-CodonPlus菌株來(lái)源于Stratagene公司高性能的BL21-Gold菌株，特別適合在大腸桿菌內(nèi)高水平表達(dá)異源蛋白。由于異源蛋白來(lái)源宿主大量存在的某些tRNA在大腸桿菌內(nèi)很是稀少，因此，想在大腸桿菌內(nèi)有效表達(dá)異源蛋白通常受到限制。外力驅(qū)動(dòng)下的高水平表達(dá)異源蛋白會(huì)耗盡已有的稀有tRNA，導(dǎo)致翻譯中止。BL21-CodonPlus菌株正是根據(jù)此缺陷而基因改造后的菌株，額外添加在大腸桿菌內(nèi)最常見(jiàn)限制異源蛋白表達(dá)的幾種tRNA的基因拷貝。這些tRNA的存在使得許多原來(lái)在傳統(tǒng)BL21菌株內(nèi)表達(dá)很弱的異源蛋白能夠在BL21-CodonPlus菌株內(nèi)大量表達(dá)。BL21-CodonPlus-RIPL補(bǔ)充大腸桿菌缺乏的4種稀有密碼子（AGA, AUA, CCC, CUA）對(duì)應(yīng)的tRNA（argU, ileY, proL, leuW），顯著提高外源基因，尤其是富含AT-或GC-基因的異源蛋白在大腸桿菌內(nèi)的表達(dá)。

BL21-CodonPlus(DE3)-RIPL菌株染色體還整合了λ噬菌體DE3溶原體（其上攜帶lacUV5啟動(dòng)子調(diào)控的T7 RNA聚合酶基因），可用于pET系列、pGEX、pMAL等載體的蛋白表達(dá)，同時(shí)具有四環(huán)素，氯mei素，鏈mei素和壯觀mei素抗性。

BL21-CodonPlus(DE3)-RIPL菌株基因型：F–ompT hsdS(rB–mB–)dcm+ TetRgal λ(DE3) endA Hte [argU proL CamR] [argU ileY leuW Strep/SpecR]

產(chǎn)品描述

本品是大腸桿菌BL21-CodonPlus(DE3)-RIPL菌株經(jīng)特殊工藝制作所得的感受態(tài)細(xì)胞，可用于DNA的熱激轉(zhuǎn)化。經(jīng)pUC19質(zhì)粒檢測(cè)轉(zhuǎn)化效率可達(dá)108 cfu/μg DNA。且在-80℃能穩(wěn)定保存幾個(gè)月轉(zhuǎn)化效率不發(fā)生改變。

保存與運(yùn)輸條件

保存：-80℃保存，六個(gè)月有效。

運(yùn)輸：干冰運(yùn)輸。

注意事項(xiàng)

1）   感受態(tài)細(xì)胞必須用干冰運(yùn)輸。感受態(tài)細(xì)胞應(yīng)在-80℃保存，不可反復(fù)凍融且放置時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，否則會(huì)減低感受態(tài)細(xì)胞的轉(zhuǎn)化效率。

2）   最好在冰上融化感受態(tài)細(xì)胞。

3）   進(jìn)行轉(zhuǎn)化操作時(shí)，需在相應(yīng)溫度及無(wú)菌條件下進(jìn)行。

4）   為防止轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)不成功，可保留部分連接反應(yīng)液以重新轉(zhuǎn)化，將損失降到zui低。

5）   產(chǎn)品包裝內(nèi)含質(zhì)粒pUC19 DNA(10pg/μl)，供對(duì)照實(shí)驗(yàn)用。

6）   為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

使用方法【所有操作均在無(wú)菌條件的標(biāo)準(zhǔn)下進(jìn)行】

1）  從-80℃冰箱取出取感受態(tài)細(xì)胞，迅速置于冰浴中，5min后待菌塊融化，加入目的DNA，用手輕彈管底輕輕混勻，冰浴靜置25min。

2）   42℃熱激45s，迅速將離心管轉(zhuǎn)移到冰浴中，冰上靜置2-3min。此過(guò)程不要搖動(dòng)離心管。

3）   向每個(gè)離心管中加700 μl無(wú)菌的SOC或LB培養(yǎng)基（不含抗生素），混勻后置于37℃ 搖床，200 rpm振蕩培養(yǎng)60min，目的使質(zhì)粒上相關(guān)的抗性標(biāo)記基因表達(dá)，使菌體復(fù)蘇。

4）   低速離心收菌（比如4000rpm，2min），留取100μl左右上清，用槍輕輕吹打重懸菌塊，之后加到含氯mei素（34μg/ml）以及所選質(zhì)粒篩選抗生素的SOC或LB固體瓊脂培養(yǎng)基上，用無(wú)菌的涂布棒將細(xì)胞均勻涂開(kāi)，將平板置于室溫（或37℃）直至液體被吸收，倒置培養(yǎng)，37℃培養(yǎng)12-16h。

【注意】：

a）涂布用量可根據(jù)具體實(shí)驗(yàn)調(diào)整。若轉(zhuǎn)化的DNA總量較多，可不用離心，直接取少量轉(zhuǎn)化產(chǎn)物涂布平板；反之，若轉(zhuǎn)化的DNA總量較少，則通過(guò)離心（4,000 rpm，2min）后吸除部分培養(yǎng)液，懸浮菌體后將其涂布于一個(gè)平板中。

b）新制備的固體培養(yǎng)基不易涂干，可將平板正置于37℃直至液體被吸收后再倒置培養(yǎng)。

c）涂布剩余的菌液可置于4℃保存，如果次日的轉(zhuǎn)化菌落數(shù)過(guò)少，可以將剩下的菌液再涂布新培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)。

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 — —Written/Edited by V. Shallan【版權(quán)歸MKBio懋康所有】

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