SYBR 14 Nucleic Acid Stain (5mM)

綠色熒光核酸染料

產(chǎn)品信息

產(chǎn)品描述

SYBR 14核酸染料（SYBR 14 Nucleic Acid Stain）通常用來監(jiān)測精子活力，通過聯(lián)合SYBR 14和碘化丙啶（PI）的雙染方式能評估精液中的活精子占比。SYBR 14是一種核酸染料，與DNA結(jié)合后的吸收波長是488nm，發(fā)射波長是518nm。SYBR 14將活精子的核染成明亮綠色，反之，PI僅將喪失膜完整性的無運動精子染成紅色。活/死精子的占比通過先用SYBR/PI染色，之后再用流式分析染料攝取的方法進行判斷。

本品以DMSO儲存液形式提供，濃度為5mM。只需用合適的生理緩沖液稀釋到工作濃度進行簡單孵育即可，適用于哺乳動物精液樣本。

保存與運輸方法

保存：-20℃避光干燥保存，至少1年有效。

運輸：冰袋運輸。

注意事項

1） 再次凍存本品前務(wù)必擰緊蓋子，管子建議直立保存。

2） 目前沒數(shù)據(jù)表明該探針具致畸性或毒性。由于該探針與核酸結(jié)合，可能被當(dāng)作一種潛在的突變劑，需做適當(dāng)?shù)姆雷o措施。由于DMSO能促進有機分子進入組織，此儲存液在使用的過程中務(wù)必妥善操作。根據(jù)當(dāng)?shù)氐恼邅硖幚硎褂帽酒泛蟮膹U液。

3） 熒光染料均存在淬滅問題，請盡量注意避光，以減緩熒光淬滅。

4） 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

染色流程

1. 工作液的準備

1.1 初次使用，將低溫保存的SYBR 14（5mM）從冰箱取出，置于室溫或25℃溫育至少30min，使其充分融化。按照單次用量分裝后，置于≤-20℃避光干燥保存。

1.2 于正式使用前，用合適的生理緩沖液稀釋SYBR 14（5mM）到10-20µM的工作液。

2. 染色流程

以下染色流程僅用作基本參考。試劑濃度必須根據(jù)精液來源、精子密度以及樣本內(nèi)的其他材料來進行優(yōu)化調(diào)整。

2.1 用含10% BSA的HEPES緩沖鹽溶液（10mM HEPES, 150mM NaCl，10% BSA，pH 7.4）稀釋樣本（比如：精液樣本）

2.2 取5µl步驟1.2新鮮制備的SYBR 14工作液，加入1ml稀釋樣本中。

2.3 37℃孵育5-10min。

2.4 用熒光顯微鏡（FITC濾片）或流式細胞儀（488nm激發(fā)器，530/30nm濾片）進行樣本分析。

染色示例

文獻來源：Anna Dziekońska et al. Fluorescence Microscopy and Flow-Cytometry Assessment of Substructures in European Red Deer Epididymal Spermatozoa after Cryopreservation. Animals 2023, 13(6), 990

實驗?zāi)康模?/strong>精子活力（Sperm Motility）

實驗步驟j：用SYBR-14和碘化丙啶（PI）評估活力（質(zhì)膜完整性）。稀釋精子樣本（200µl）加入2µl SYBR-14（1mM）和2µl PI（2.4 μM in Tyrode’s salt solution），37℃避光孵育10min。分別觀察帶綠頭的精子（SYBR-14+/PI?，具完整膜結(jié)構(gòu)的活精子）和帶紅頭的精子（死精子）。

實驗步驟k：為了評估質(zhì)膜完整性，精子用SYBR-14和碘化丙啶（PI）染色。稀釋樣本（500µl）用3µl SYBR-14（1mM）和3µl PI（2.4 μM in Tyrode’s salt solution）染色。帶綠色熒光的SYBR-14陽性精子和PI陰性精子被分類為具完整膜結(jié)構(gòu)的活精子細胞。

染色圖片（流式）：

Fig 1：(A) Sperm viability (SYBR+/PI?). (B) Cytogram of a SYBR-14/PI stain.

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