DirectPCR Lysis Reagent (Cell) 細(xì)胞直接PCR裂解液

【單瓶試劑，細(xì)胞裂解+PCR一步到位】

產(chǎn)品關(guān)鍵詞：

Viagen Biotech; DirectPCR^® 直接PCR；PCR genotyping 基因分型；Proteinase K蛋白酶K；302-C (301-C)；

產(chǎn)品介紹：

Viagen DirectPCR® DNA Extraction System（DirectPCR^® DNA提取系統(tǒng)）是一種單管系統(tǒng)，用于從小鼠尾巴，耳片，卵黃囊和培養(yǎng)細(xì)胞內(nèi)快遞制備DNA。Viagen Biotech, Inc科學(xué)家開(kāi)發(fā)的組分（正在申請(qǐng)）允許用DirectPCR® DNA Extraction System獲得的DNA提取物與基因分型用的基因組PCR兼容。生物樣本的粗提物與許多分子生物學(xué)級(jí)的試劑比如PCR都難以兼容，部分原因在于粗提物內(nèi)含有抑制劑。DirectPCR^®不僅介導(dǎo)生物樣品的快速裂解，而且含有抑制劑，能夠有效抑制PCR擴(kuò)增用粗提裂解物中存在的抑制效應(yīng)，同時(shí)zui大程度保持釋放出來(lái)的基因組DNA的完整性。申請(qǐng)中的DirectPCR^®操作起來(lái)，*消除任何溶液轉(zhuǎn)移或開(kāi)管步驟，根本上節(jié)省了大量時(shí)間和精力。

產(chǎn)品特點(diǎn)：

1） 省時(shí)：更少的動(dòng)手時(shí)間；尾巴裂解液粗提物即可用于PCR；

2）   省錢(qián)：僅需成本的反應(yīng)流程；

3）   安全：無(wú)有機(jī)試劑；

4）   環(huán)保：更少消耗（有機(jī)試劑，管子，槍頭等等）

5）   可靠有效：100%成功率保證高產(chǎn)量

詳細(xì)流程：

1）    10cm細(xì)胞培養(yǎng)板細(xì)胞，使用添加新鮮制備的0.2-0.4mg/ml蛋白酶K的200-300μl DirectPCR^® Lysis Reagent (Cell) 細(xì)胞裂解液重懸細(xì)胞。蛋白酶K在DirectPCR^®中穩(wěn)定保存~24h。如果處理少量細(xì)胞，會(huì)很難稱(chēng)量蛋白酶K酚末，可直接使用Viagen提供的基因組PCR級(jí)的蛋白酶K溶液（Cat#501-PK），使用濃度為0.5-1.0mg/ml（每1ml DirectPCR^®中加入25-50μl蛋白酶K溶液）。【注意】：若使用小量細(xì)胞，可用去離子水稀釋DirectPCR^®高達(dá)10倍，然后使用合適更多體積的裂解液用于PCR。見(jiàn)表1，DirectPCR^® Lysis Reagent (Cell) 起始使用條件。

2）   置于旋轉(zhuǎn)雜交爐中，55℃轉(zhuǎn)動(dòng)管子處理5-6h或直到看不見(jiàn)組織團(tuán)。若有必要，能過(guò)夜裂解樣本，不會(huì)影響效率。*裂解至關(guān)重要。要想獲得更具有重復(fù)性的結(jié)果，中途搖動(dòng)一下瓶子以更換管子的位置一次，在處理2-3h之后。

3）   水浴鍋內(nèi)85℃孵育粗提液45min?！究蛇x】于步驟4）前離心10s沉淀毛發(fā)。粗提液可置于-20℃保存1年（或4℃保存1周），不會(huì)降低效率。

4）   每50μl PCR反應(yīng)體系加入0.5-1.0μl裂解液。推薦PCR用Qiage Hotstar Taq DNA polymerase或Sigma JumpStart Taq DNA polymerase。

表1，DirectPCR^® Lysis Reagent (Cell)起始使用條件。

* Lysis using rotation hybridization oven. 

** Lysis using rocking plate. Wash cells in 96-well plate twice with phosphate buffered saline and add 60 µl DirectPCR Reagent (Cell), which has been 2-fold diluted.  Incubate at 55°C overnight. Place the 96-well plate in the wet chamber and float the chamber on the 85°C water bath for 1.5 hrs.  Pipette up and down several times. Take 1 µl of lysates for PCR.

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DirectPCR Lysis Reagent (Cell) Protocol Manual

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