Bialaphos, Sodium Salt 雙丙氨膦鈉鹽

【除草劑，bar/pat轉(zhuǎn)基因篩選標(biāo)記】

搜索關(guān)鍵詞：除草劑；轉(zhuǎn)基因植物篩選標(biāo)記；農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化；草銨膦（Glufosinate Ammonium）草丁膦（phosphinothricin，PPT）；雙丙氨膦（Bialaphos）；bar基因；pat基因；草銨膦-N-乙酰轉(zhuǎn)移酶；谷an酰胺合成酶（GS）；CAS：71048-99-2；

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除草機(jī)制：

雙丙氨膦（Bialaphos，也稱為Bilanafos）是由幾種土壤鏈霉菌代謝產(chǎn)生的一種天然有機(jī)磷三肽抗生素，結(jié)構(gòu)上由兩個(gè)L-丙an酸殘基和一個(gè)谷an酸類似物草丁膦（phosphinothricin，PPT；也稱為glufosinate）組成。一旦進(jìn)入正常細(xì)胞（不含抗性基因），其內(nèi)的肽酶水解雙丙氨膦，釋放草丁膦化合物，從而抑制正常氮代謝和導(dǎo)致胞內(nèi)氨累積，破壞谷an酰胺合成酶（glutamine synthetase，GS）相關(guān)的各種代謝活動(dòng)，zui終殺死細(xì)胞。雙丙氨膦不僅是一種廣譜除草劑，還能強(qiáng)效抑制革蘭氏陰性菌、革蘭氏陽性菌、和一些真菌類植物病原菌生長。

植物基因工程研究（篩選標(biāo)志）作用機(jī)理：

雙丙氨膦可用在許多植物物種（包括小麥，大麥，黑麥，燕麥，水稻和玉米）的轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)，用來篩選含bar基因（from Streptomyces hygroscopicus）或pat基因（from Streptomyces viridochromeogenes）的轉(zhuǎn)基因工程細(xì)胞系，這兩種基因都能編碼草丁膦N-乙酰轉(zhuǎn)移酶（phosphinothricin N-acetyltransferase），使其轉(zhuǎn)化成為一種無GS抑制活性的化合物，從而使得細(xì)胞對雙丙氨膦和草丁膦產(chǎn)生抗性。轉(zhuǎn)基因玉米研究，雙丙氨膦比草銨膦的活性更強(qiáng)；轉(zhuǎn)基因小麥研究，雙丙氨膦是zui可靠的選擇標(biāo)準(zhǔn)；酵母基因工程中，雙丙氨膦逐漸成為重要的選擇標(biāo)準(zhǔn)。

基本特性：

1）CAS NO：71048-99-2

2）同義名：2S-amino-4-(hydroxymethylphosphinyl)butanoyl-L-alanyl-L-alanine, monosodium salt; SF-1293;

3）分子式：C₁₁H₂₁N₃O₆P·Na

4）分子量：345.26 g/mol

5） 外觀：白色或淺棕色結(jié)晶性粉末

6）純度：≥95%

7）溶解性：溶于水（10mg/ml）

8） 化學(xué)結(jié)構(gòu)式：

應(yīng)用案例【轉(zhuǎn)基因的小麥幼胚/愈傷組織篩選】（僅作參考）：

1. 使用草銨膦（PPT）或雙丙氨膦進(jìn)行轉(zhuǎn)化細(xì)胞的篩選；

2. 粒子轟擊（bombardment）后將未成熟幼胚逐個(gè)轉(zhuǎn)移到E3培養(yǎng)基，維持培養(yǎng)7-14天；

3. 胚胎轉(zhuǎn)移到含5µg/ml PPT（或雙丙氨膦）的MSCB5培養(yǎng)基（*輪篩選用培養(yǎng)基），黑暗培養(yǎng)2周；于這2周內(nèi)不能正常生長的愈傷組織直接扔棄。

4. 用解剖刀將在MSCB5培養(yǎng)基上增殖的細(xì)胞簇解離，亞克隆，轉(zhuǎn)移到含有10 µg/ml PPT（或雙丙氨膦）的MSCB10培養(yǎng)基，維持培養(yǎng)4周。

5. 在含5µg/ml或10µg/ml PPT（或雙丙氨膦）的培養(yǎng)基上篩選過程的持續(xù)周期約為50-75天。將所有培養(yǎng)物放到植物生長培養(yǎng)箱內(nèi)，設(shè)置25 °C，黑暗培養(yǎng)。每一個(gè)轉(zhuǎn)基因愈傷組織在含有篩選標(biāo)志的培養(yǎng)基上zui終生長為大量的胚性愈傷組織。

6. 設(shè)置1-10µg/ml PPT（或雙丙氨膦）的梯度濃度來測試未轉(zhuǎn)化愈傷組織，以建立更加有效的篩選系統(tǒng)。每一次實(shí)驗(yàn)大概準(zhǔn)備20個(gè)目標(biāo)培養(yǎng)平板。2個(gè)為對照，1個(gè)在N6C1上生長以監(jiān)測培養(yǎng)物的健康情況，另1個(gè)在含5-10µg/ml雙丙氨膦的N6C1上生長以驗(yàn)證未轉(zhuǎn)化細(xì)胞對選擇標(biāo)志的反應(yīng)。

【注意】：轉(zhuǎn)基因小麥愈傷組織的選擇實(shí)驗(yàn)中雙丙氨膦是有效的篩選標(biāo)志，然而雙丙氨膦不能殺死未轉(zhuǎn)化細(xì)胞。為了得到理想的篩選效果，建議低密度（大概每個(gè)平板上10個(gè)未成熟幼胚）亞培養(yǎng)粒子轟擊后的細(xì)胞。

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注意事項(xiàng)

為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

— —Written/Edited by V. Shallan【版權(quán)歸MKBio懋康所有】

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 Sodium Salt 雙丙氨膦鈉鹽 抗生素

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